Serviço personalizado : Produção de policlonais de ratinho após imunização genética
Esta técnica permite fazer com que o rato expresse in vivo o gene que codifica o antigénio de interesse.
O plasmídeo que contém o gene é injetado diretamente em ratinhos que expressarão assim o antigénio em causa in vivo. O plasmídeo que contém o gene de interesse é injetado diretamente no animal, que expressará a proteína in vivo.
De entre as células transfectadas, as células apresentadoras de antigénios (APC) apresentam as moléculas em causa aos actores da resposta imunitária através do MHC.
Uma parte destes intervenientes, as células B, produzirá anticorpos específicos.
Protocolo padrão :
- Construção do plasmídeo do vetor de expressão de ADN com um promotor de CMV e potenciadores que contêm a ORF do antigénio
- Transfecção de células HEK293 com o ADN do plasmídeo e preparação do extrato de antigénio
- Injeção do ADN do plasmídeo em ratinhos 3 vezes
- Sangria dos ratinhos
- Teste dos soros para determinação do título específico do antigénio utilizando o extrato proteico (em HEK293) como antigénio de revestimento
- Se o título não for satisfatório, 1 ou 2 outros reforços
- Se o título for satisfatório, seguir o processo com o resto das etapas de recolha de líquido ascítico
Números-chave :
- Número mínimo de ratinhos : ...4.....
- Duração do protocolo: 100-140........ dias
- Número de injecções por animal: 3-5.....
- Quantidade de antigénio por injeção: ...20.... µg/rato
- Número de colheitas de amostras por animal : 1 - 2.....
Serviços conexos disponíveis :
=> Síntese de genes
=> Clonagem de genes
=> Síntese de péptidos/produção recombinante
=> Produção de outros policlonais
=> Produção de monoclonais
=> Marcação de anticorpos
=> Purificação de anticorpos
=> Fragmentação de anticorpos
=> Redobragem de anticorpos
=> Validação de anticorpos