Serviço personalizado : Produção de monoclonais de lhama
Serviços de construção e triagem de biblioteca de anticorpos de domínio único VHH de lhama
Os nossos processos optimizados de construção de bibliotecas e de rastreio com tecnologia de exposição de fagos garantem o isolamento bem sucedido de clones VHH de elevada afinidade num curto espaço de tempo.
Vantagens dos anticorpos de domínio único VHH de lhama:
- Os anticorpos de domínio único VHH têm apenas 15kD de tamanho, em comparação com os cerca de 150kD das imunoglobulinas típicas
- O tamanho mais pequeno dos anticorpos de domínio único permite-lhes encaixar fisicamente em epítopos que normalmente não são acessíveis aos anticorpos tradicionais, incluindo o local ativo de muitas enzimas
- O tamanho mais pequeno também lhes permite penetrar mais rapidamente nos tecidos, atravessando mesmo facilmente a barreira hemato-encefálica
- Os anticorpos VHH são extremamente estáveis e são resistentes à acidez e à temperatura elevadas, sendo mesmo capazes de se dobrar novamente numa proteína funcional após desnaturação
- Os anticorpos de domínio único têm uma solubilidade muito elevada devido ao aumento da hidrofobicidade
- O tamanho reduzido e a estabilidade tornam os anticorpos VHH candidatos ideais para aplicações terapêuticas e de diagnóstico.
Pormenores da produção de anticorpos de domínio único VHH:
- Imunização da lhama
- Construção de bibliotecas de display de fagos: Monitorizamos o título antissoro por ELISA e recolhemos múltiplas hemorragias de produção e células PBMC ao longo da imunização. As células PBMC são preservadas em tampão de lise de ARN em diferentes momentos, para que os repertórios de anticorpos sejam preservados durante o processo de imunização. No final do protocolo de imunização, o cliente pode escolher o PBMC em qualquer momento de recolha para construir a biblioteca.
- Seleção da biblioteca VHH e determinação da afinidade: A biblioteca construída será analisada através de várias rondas de ligação/seleção por afinidade com antigénio. Os clones positivos serão identificados por ELISA. Os genes destes clones positivos serão analisados por sequenciação. A afinidade de cada ligante será determinada por ELISA. Dependendo da complexidade do antigénio, serão entregues um a três clones com a melhor afinidade.
- Purificação de anticorpos VHH em grande escala: Para cada clone positivo, forneceremos ~100ug de proteína purificada sem custos adicionais. Estão disponíveis proteínas de anticorpos adicionais a um custo adicional.
-Biblioteca de phage display de VHH ingénua: A nossa mais recente biblioteca VHH de lhamas não imunizadas abrange repertórios VHH grandes e diversificados, representando mais de 2,0x109 células mononucleares periféricas de 20 lhamas não imunizadas. A biblioteca tem mais de 2x109 clones independentes.