NeoPrep mini

NeoPrep mini

Descrição

  • O projeto da Neo Biotech miniprep kits (NB-60-0001) oferecem uma forma rápida e eficiente de extrair ADN plasmídico puro de Escherichia coli.
  • O processo inclui a lise alcalina de células bacterianas e a ligação do ADN à sílica em condições de elevado teor de sal.
  • O ADN resultante é ideal para PCR, sequenciação fluorescente automatizada e várias aplicações enzimáticas.
          

 

Condições de armazenamento e preparação de reagentes

Todos os componentes do kit podem ser armazenados à temperatura ambiente (20-25 °C) e são estáveis até ao fim do prazo de validade. Antes de utilizar, adicionar 1 mL de tampão A1 ao frasco de RNase A e agitar em vórtice. Transferir a solução resultante para o frasco de tampão A1 e misturar bem. O tampão A1 com RNase deve ser armazenado a 4 °C para utilização frequente e a -20 °C para utilização pouco frequente. Adicionar 32 ml de etanol a 100% de grau de biologia molecular a cada frasco de tampão A4. O tampão A2 pode formar um precipitado aquando da armazenagem. Se necessário, dissolver o precipitado aquecendo a solução a 37 °C. Os tampões A3 e AY contêm cloridrato de guanidina. Usar luvas e óculos de proteção quando utilizar este kit.

 

Componentes do sistema

• Buffer A1 - 15 mL

• Buffer A2 - 15 mL

• Buffer A3 - 20 mL                  

 

• Buffer AY - 30 mL

• Buffer A4 (concentrar) - 8 mL

• Buffer AE (não contém EDTA) - 15 mL               

 

• RNase A - 5 mg

• Neo Biotech Colunas de rotação - 50

• Tubos de recolha (2 mL) - 50

 

 

Cultivo de culturas bacterianas:

 

  • O meio LB é recomendado para a cultura de células bacterianas, mas também podem ser utilizados meios ricos como 2xYT ou TB.
  • Os meios ricos promovem um crescimento mais rápido e uma entrada precoce na fase estacionária em comparação com o LB.
  • No entanto, a utilização de meios ricos pode levar a um maior número de células mortas ou em estado de fome, resultando em ADN plasmídico parcialmente degradado e potencial contaminação com ADN cromossómico.
  • As culturas com crescimento excessivo podem conter material bacteriano em excesso, afectando as etapas de lise e precipitação.
  • Para começar, selecionar uma única colónia de uma placa selectiva e inocular 1-5 mL de meio LB com o antibiótico adequado.
  • Incubar durante 12-16 horas a 37°C com agitação vigorosa.