Corantes para Microscopia de Super-Resolução
Corantes CF® para microscopia de super-resolução multicolorida
Publicações recentes que comparam corantes sintéticos para imagiologia de super-resolução mostraram que os corantes CF® apresentam o melhor desempenho para vários métodos. O brilho superior, a fotoestabilidade e as propriedades de comutação fotoquímica de certos corantes CF® são ideais para 3-D SIM, 3-D STORM e outras técnicas de super-resolução.
O CF®405M da Biotium foi considerado o corante fluorescente de comprimento de onda curto mais brilhante e mais fotoestável para SIM. Vários corantes CF® que abrangem os espectros do vermelho visível, do vermelho distante e do infravermelho próximo foram validados para STORM, incluindo imagens a três cores com CF®568, CF®647 e CF®680. Ver Lehmann et al. 2015, e uma lista completa de referências na página seguinte. A Biotium oferece uma vasta seleção de anticorpos marcados com corante CF®, incluindo secundários de marcação única com baixo grau de marcação, que é considerado ideal para STORM1. Também oferecemos outros conjugados, corantes reactivos e kits de marcação.
O CF®405M da Biotium foi considerado o corante fluorescente de comprimento de onda curto mais brilhante e mais fotoestável para SIM. Vários corantes CF® que abrangem os espectros do vermelho visível, do vermelho distante e do infravermelho próximo foram validados para STORM, incluindo imagens a três cores com CF®568, CF®647 e CF®680. Ver Lehmann et al. 2015, e uma lista completa de referências na página seguinte. A Biotium oferece uma vasta seleção de anticorpos marcados com corante CF®, incluindo secundários de marcação única com baixo grau de marcação, que é considerado ideal para STORM1. Também oferecemos outros conjugados, corantes reactivos e kits de marcação.
Figura 1. O CF®568 (à esquerda) produz melhores imagens do que o Cy®3b (à direita) na microscopia STORM 3-D.
As células fixadas foram coradas com anticorpo anti-tubulina de ratinho seguido de anticorpos secundários antimouse conjugados com corante. Ver legenda da Figura 2 para as condições de imagiologia. As moléculas de corante foram foto-activadas e visualizadas utilizando um laser de 560 nm; foi utilizado um laser de 405 nm para auxiliar a reativação do corante para o estado de emissão
As células fixadas foram coradas com anticorpo anti-tubulina de ratinho seguido de anticorpos secundários antimouse conjugados com corante. Ver legenda da Figura 2 para as condições de imagiologia. As moléculas de corante foram foto-activadas e visualizadas utilizando um laser de 560 nm; foi utilizado um laser de 405 nm para auxiliar a reativação do corante para o estado de emissão
Figura 2. Comparação da microscopia convencional de campo alargado (esquerda) com a STORM (direita) utilizando conjugados de corantes CF®.
As células fixadas foram coradas com anticorpo anti-tubulina de ratinho seguido de anticorpo secundário anti-rato conjugado com corante CF® (linha superior: CF®647, linha do meio: CF®660C, linha inferior: CF®680). Para STORM, as amostras foram seladas em tampão que continha 5% (p/v) de glucose, 100 mM de cisteamina, 0,8 mg/mL de glucose oxidase e 40 μg/mL de catalase, em Tris-HCl (pH 7,5). As amostras foram visualizadas num microscópio Nikon Ti-Eclipse w/ PFS com uma objetiva de óleo CFI Plan Apo Lambda 100x. As moléculas de corante foram fotossensibilizadas e visualizadas com um laser de 647 nm; foi utilizado um laser de 405 nm para auxiliar a reativação do corante para o estado de emissão. A emissão foi recolhida com uma câmara EMCCD Andor iXon Ultra 897 para um total de 100.000 fotogramas por imagem a uma taxa de fotogramas de 110 Hz.
As células fixadas foram coradas com anticorpo anti-tubulina de ratinho seguido de anticorpo secundário anti-rato conjugado com corante CF® (linha superior: CF®647, linha do meio: CF®660C, linha inferior: CF®680). Para STORM, as amostras foram seladas em tampão que continha 5% (p/v) de glucose, 100 mM de cisteamina, 0,8 mg/mL de glucose oxidase e 40 μg/mL de catalase, em Tris-HCl (pH 7,5). As amostras foram visualizadas num microscópio Nikon Ti-Eclipse w/ PFS com uma objetiva de óleo CFI Plan Apo Lambda 100x. As moléculas de corante foram fotossensibilizadas e visualizadas com um laser de 647 nm; foi utilizado um laser de 405 nm para auxiliar a reativação do corante para o estado de emissão. A emissão foi recolhida com uma câmara EMCCD Andor iXon Ultra 897 para um total de 100.000 fotogramas por imagem a uma taxa de fotogramas de 110 Hz.
CF® Dyes e produtos relacionados