Kit de determinação do crescimento celular

Foi demonstrado que a proliferação celular tem múltiplas funções no desenvolvimento e na formação de padrões, incluindo papéis no crescimento, morfogénese e expressão genética.
Os métodos normalmente utilizados para este fim são a contagem em hemocitómetro, a determinação do teor de proteínas, a medição do peso húmido ou seco e a determinação da densidade ótica (DO). Enquanto a contagem hemocitométrica e a determinação de proteínas têm a desvantagem de serem demoradas e fastidiosas, a medição do peso húmido ou mesmo seco não é prática para volumes de cultura muito pequenos.
Um método alternativo baseia-se na transformação e quantificação colorimétrica do MTT [brometo de 3-(4,5-dimetiltiazol-2-il)-2,5-difeniltetrazólio]. A cadeia respiratória e outros sistemas de transporte de electrões reduzem o MTT e outros sais de tetrazólio, formando assim cristais de formazan violeta não solúveis em água no interior da célula. A quantidade destes cristais pode ser determinada espectrofotometricamente e serve como uma estimativa do número de mitocôndrias e, consequentemente, do número de células vivas na amostra. Estas características podem ser aproveitadas em ensaios de citotoxicidade ou de proliferação celular, que são amplamente utilizados em imunologia, toxicologia e biologia celular.

Princípio :  
O princípio do ensaio MTT baseia-se na atividade mitocondrial. Para as células viáveis, a atividade mitocondrial é constante, pelo que um aumento ou diminuição do número de células viáveis está linearmente relacionado com a atividade mitocondrial. A atividade mitocondrial das células é reflectida pela conversão do sal de tetrazólio MTT em cristais de formazan, que podem ser solubilizados para medição homogénea. Assim, qualquer aumento ou diminuição do número de células viáveis pode ser detectado através da medição espectrofotométrica da concentração de formazan utilizando um leitor de placas a 570 nm vs 690 nm.

Componentes do kit :  Solução de MTT + solvente de MTT