NeoTaqII DNA polymérase

Conditions de stockage

• Tous les composants doivent être conservés à -20°C dans un congélateur sans cycles de décongélation afin de garantir une durée de conservation maximale.
• L'enzyme reste stable à 4°C ou à température ambiante jusqu'à 3 jours sans compromettre sa stabilité.
• Le produit restera stable jusqu'à la date de péremption s'il est stocké comme spécifié.

Définition de l'unité

• Une unité d'enzyme est définie comme la quantité nécessaire pour catalyser l'incorporation de 10 nmoles de dNTP dans un matériau insoluble dans l'acide en 30 minutes à 72 °C dans des conditions d'essai contrôlées.

Concentration de l'enzyme

• La concentration enzymatique est de 5 U/μL, dissoute dans du glycérol.

Solution de chlorure de magnésium

• Une solution de MgCl2 de 50 mM fournie permet aux utilisateurs d'optimiser la concentration de Mg2+ dans les configurations PCR.
• Une concentration de 2,5 mM de MgCl2 est généralement efficace avec l'ADN polymérase Taq II de Neo Biotech.
• Bien vortexer la solution de MgCl2 après décongélation.

Conception des amorces

• Les amorces PCR doivent être comprises entre 15 et 30 bases et encadrer la région d'intérêt.
• Les amorces doivent contenir 40 à 60 % de GC et éviter les séquences susceptibles de produire une structure secondaire interne.
• Les extrémités 3' des amorces ne doivent pas être complémentaires afin d'éviter la formation de dimères d'amorces.
• Éviter trois nucléotides G ou C consécutifs près de l'extrémité 3'- pour empêcher l'annexion non spécifique de l'amorce.
• Idéalement, les deux amorces devraient avoir des températures de fusion (Tm) presque identiques pour un recuit efficace.

Modèle d'ADN

• La quantité recommandée de matrice d'ADN génomique est de 10 ng à 500 ng, mais une quantité aussi faible que 5 pg peut être utilisée.
• Des quantités inférieures peuvent être suffisantes pour l'amplification d'ADN moins complexe (1-20 ng).
• Lors de l'utilisation de l'ADNc synthétisé comme matrice, ne pas dépasser 10 % du volume final de la réaction PCR.

Essais de contrôle de la qualitétaq

• La pureté de l'ADN polymérase Taq II est testée, une pureté de >90 % étant déterminée par électrophorèse sur gel de polyacrylamide SDS et coloration au bleu de Coomassie.
• La contamination par l'ADN génomique est évaluée par PCR et ne doit pas être détectable.

Essais de nucléase

• Les essais de nucléase sont réalisés en utilisant l'ADN plasmidique pNZY28 et l'ADN polymérase Neo Biotech Taq II, suivis d'une visualisation sur un gel d'agarose coloré au GreenSafe Premium.
• Aucune entaille ou coupure visible de l'acide nucléique ne doit être observée. Des tests similaires sont effectués avec le tampon de réaction et la solution de MgCl2.

Essai fonctionnel

• L'ADN polymérase Taq II a fait l'objet de nombreux tests de performance pour l'amplification par PCR de fragments d'ADN de différentes tailles à partir d'ADN génomique humain.
• Les produits PCR obtenus doivent apparaître sous forme de bandes uniques sur un agarose coloré