Réactifs et instruments pour l'immunologie, la biologie cellulaire et la biologie moléculaire.
 
> > Protocole universel de PCR quantitative (qPCR) avec SYBR Green

Protocole universel de PCR quantitative (qPCR) avec SYBR Green

Ce protocole est destiné à être utilisé mais sans s'y limiter avec: ABI PRISM®7000, 7700 et 7900HT; l'ABI 5700, ABI 7300 et7500 Real-Time PCR Systems, le Stratagene Mx3000P®, Mx3005P™, et Mx4000®, le Corbett Research Rotor-Gene™, le MJ Research DNA Engine Opticon™, Opticon® 2, et Chromo 4™ Real-Time Detector, Eppendorf Mastercycler® ep realplex, Roche LightCycler® 480, Bio-Rad CFX96 et le Cepheid Smart Cycler®.

Protocole KAPA™ SYBR® FAST qPCR Master Mix (2X) Universal




Réactifs :
- Matrice ADN
- Amorce sens
- Amorce antisens
- Master Mix (2X)
- Eau de qualité PCR


Protocole général de qPCR

Etape 1: Réaction d'installation de la qPCR
- Avant la préparation des réactions de qPCR reactions, bien mélanger l'ADN matrice, les amorces et les sondes.
- Calculer les volumes requis de chaque composant selon le tableau suivant:

Concentration finale 20μl rxn
Eau de qualité PCR jusqu'à 20μl Selon besoins
Master Mix (2X) qPCR 1X 10μl
Amorce sens (10μM) 200 nM 0.4μl
Amorce antisens (10μM) 200 nM 0.4μl
Matrice ADN (<20 ng/20μl rxn) Variable
ROX élevé/bas (optionnel) 0.4μl

Etape 2: Configuration de la plaque
- Transférer le volume approprié de mélange réactionnel dans chaque puits d'une plaque ou sans un tube de PCR. Les volumes réactionnels peuvent être réduits de 20μl à 10μl si des tubes/plaques de faible volume sont utilisés.
- Couvrir ou sceller le tube/la plaque de réaction et centrifuger brièvement.

Etape 3: Exécution de la réaction qPCR
- Si possible, sélectionner le mode rapide sur l'instrument.
- Programmer le protocole suivant:
  • Activation enzymatique à 95 °C pendant 20 sec - 3 min (1 cycle)
  • Dénaturer à 95 °C pendant 1 - 3 sec
  • Appariement/Elongation/Acquisition à 60 ºC moins de 20 sec
  • Dissociation selon les instructions de l'appareil
Faire 40 cycles des points 2 et 3.

Etape 4: Analyse des résultats
- L'analyse des données varie en fonction de l'instrument utilisé. Se référer à votre guide de l'utilisateur de l'instrument.

Liste de produits