Abbexa

 

Abbexa est un fournisseur mondial spécialisé dans les outils biologiques destinés aux secteurs de la recherche et du développement dans les domaines des sciences de la vie, de la pharmacie et de la biotechnologie. Abbexa fournit à la communauté scientifique des anticorps primaires, des anticorps secondaires, des protéines, des kits ELISA et des enzymes, ainsi que d'autres kits et outils destinés à la recherche. Abbexa propose également des services de production de protéines, de peptides et d'anticorps sur mesure pour répondre aux besoins de ses clients.

Abbexa s'engage à fournir aux scientifiques et aux chercheurs la meilleure expérience client et des produits de haute qualité.

La mission d'Abbexa est d'offrir une expertise inégalée et des produits consommables de laboratoire de qualité exceptionnelle, en s'efforçant de s'améliorer constamment. N'hésitez pas à nous contacter pour nous faire part de vos commentaires concernant le site web, le service, les produits ou tout autre sujet.

 

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ELISA Kits for Accurate Detection

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PCR Conventionnelle

PCR Conventionnelle



La PCR (Polymerase Chain Reaction) est un test in vitro pour la réplication de l'ADN qui permet à une séquence "cible" d'ADN d'être sélectivement amplifiée plusieurs millions de fois en quelques heures.

Une réaction de PCR classique nécessitent différents composants et réactifs. Ces composants inclus :

  • Echantillon d'ADN contenant la région d'ADN (Cible) à amplifier
  • ADN polymerase, qui doit être résistante à la température pour pouvoir rester intacte pendant le processus de dénaturation de l'ADN
  • 2 amorces (primers) qui sont complémentaires des extrémités 3' des brins sens et anti-sens de l'ADN cible (l'ADN polymérase peut uniquement se lier et procéder à l'élongation d'un double brin d'ADN et sans les amorces l'élongation est impossible)
  • Desoxynucléotides triphosphate (dNTP), qui représentent les briques de construction nécessaire à l'ADN polymérase pour synthétiser un nouveau brin d'ADN
  • Solution tampon, qui apporte un environnement chimique suffisant pour une activité et une stabilité optimale de l'ADN polymérase
  • Cations bivalents, ions magnésium ou manganèse. Généralement se sont les ions Mg2+ qui sont utilisés mais les ions Mn2+ peuvent également être utilisés pour la mutagenèse
  • Ions potassium monovalents

Typiquement, la PCR consiste en une série de 20-40 changements de température, appelés cycles. Chaque cycle consiste en 2-3 étapes à températures différentes. Les cycles sont précédés par une étape à haute température (>90 °C), et suivis une étape finale d'extension. Les températures utilisées ainsi que le temps appliqués à chaque cycle dépendent de plusieurs paramètres. Ceci inclu l'enzyme utilisée pour la synthèse de l'ADN, la concentration des ions divalents et des dNTPs et la température d'hybridation (Tm) des amorces.

  • Etape d'initialisation (uniquement pour les ADN polymérases qui nécessitent une activation par température (Hot-Start PCR) : Cette étape se fait à une température de 94-96°C (ou 98°C pour les polymérases extrêmement thermostables) pendant 1-9 minutes.
  • Etape de dénaturation : Cette étape est le premier événement d'un cycle, elle se fait à une température de 94-98°C pendant 20-30 secondes. Ceci provoque la dénaturation de l'ADN en cassant les liaisons hydrogène entre les bases complémentaires, on a alors 2 molécules d'ADN simple brin.
  • Etape d'hybridation: La temprérature de cette étape est plus faible (60-65°C pendant 20-40 secondes) pour permettre l'hybridation des amorces sur les brins d'ADN.
  • Etape d'élogation : he La température de cette étape dépend de l'ADN polymérase utilisée : la Taq polymérase a une activité maximale à 75-80°C, la température de 72°C est le plus souvent utilisée. A cette étape, l'ADN polymérase synthétise un nouveau brin complémentaire en ajoutant des dNTPs complémentaire à la séquence cible dans la direction 5'-3'. Le temps d'élongation dépend à la fois l'ADN polymérase utilisée et de la longueur du fragment à amplifier.